De los diversos componentes que hacen al funcionamiento del LAMAE, se pueden mencionar los Proyectos de Investigaci贸n y Desarrollo. Estos proyectos son la principal fuente de conocimiento y financiamiento en las investigaciones y desarrollos del laboratorio. Los fondos obtenidos provienen de diferentes instituciones y organismos.

Proyectos I+D:

2018 - 2020
Diagn贸stico por im谩genes a micro-escala para la caracterizaci贸n de la movilidad celular y bacteriana utilizando herramientas microflu铆dicas


Dir.: Dr. Mi帽o, Gast贸n
Descripci贸n
Este proyecto propone generar tecnolog铆as te贸rica-experimentales aplicadas con base en la inform谩tica de bioim谩genes y la visi贸n artificial, que permitan estudiar el seguimiento de c茅lulas o bacterias m贸viles utilizando herramientas microflu铆dicas adecuadas junto con diferentes t茅cnicas microsc贸picas de visualizaci贸n. El proyecto propuesto se encuadra en el campo de la Bioinform谩tica aplicada al agro y la salud y busca generar herramientas que permitan diagnosticar y clasificar anomal铆as celulares morfol贸gicas que se vean flejadas en la movilidad. Estas herramientas podr谩n ofrecer una soluci贸n autom谩tica al an谩lisis del movimiento celular y proporcionar informaci贸n estad铆stica de una poblaci贸n celular espec铆fica. La transferencia de las mismas al 谩mbito del agro y la salud producir谩n un fuerte impacto cuando estas herramientas sean aplicadas a la evaluaci贸n de la motilidad esperm谩tica.

2017 - 2020
Dise帽o y desarrollo de un sistema de microscopia de Iluminaci贸n Selectiva de Planos


Dir.: Dr. Casco, V铆ctor Hugo
Descripci贸n
En las ciencias biol贸gicas pocos resultados son tan contundentes como los que pueden demostrarse mediante las im谩genes de microscopia. Bajo esta premisa, el Laboratorio de Microscopia Aplicada a Estudios Moleculares y Celulares (LAMAE) de la FIUNER se ha caracterizado por desarrollar e implementar t茅cnicas mensionales de microscopia 贸ptica. Sin embargo, dichos esfuerzos han estado enfocados en los estudios de espec铆menes fijados por lo que el presente proyecto constituir铆a un desaf铆o para la realizaci贸n de estudios de espec铆menes biol贸gicos vivos de relativamente gran tama帽o que se sumar铆an a las t茅cnicas de microscopia 贸ptica disponibles. Mediante la presente propuesta se pretende implementar la tecnolog铆a de microscopia de iluminaci贸n selectiva de planos (SPIM, del ingl茅s: selective plane ilumination microscopy) sobre un sistema invertido del laboratorio. La SPIM se utiliza para generar im谩genes multidimensionales de alta resoluci贸n de muestras de 100um hasta 5 mm. En el proyecto se propone el dise帽o y desarrollo de los sistemas de iluminaci贸n, de montaje y posicionamiento del porta esp茅cimen. Se emplear谩 el proceso de impresi贸n 3D y en base a motores paso a paso, se construir谩 el sistema de montaje y posicionamiento del porta esp茅cimen para estudios in vivo.

2018 - 2021
Dispositivo para el estudio de adhesi贸n bacteriana en pr贸tesis met谩licas: formaci贸n de biopel铆culas en contacto con superficies met谩licas


Dir.: Dr. Mi帽o, Gast贸n
Descripci贸n
La adhesi贸n bacteriana es el primer y m谩s importante paso en la infecci贸n de implantes met谩licos. Este proceso es complicado y est谩 influenciado por m煤ltiples variables tales como factores ambientales, propiedades concernientes a los microorganismos, propiedades de la superficie del material utilizado, la presencia de prote铆nas tisulares, etc. Dentro de las propiedades del substrato, encontramos: la composici贸n qu铆mica del material, la carga el茅ctrica de la superficie, la hidrofobicidad, la rugosidad de las superficies y la presencia de prote铆nas espec铆ficas de superficie. Una vez producida la adhesi贸n, las bacterias tienen la capacidad de formar estructuras m谩s complejas cuando sensan la presencia de otras bacterias. Esta etapa representa el estad铆o inicial en la formaci贸n de biopel铆culas. El advenimiento de nuevas t茅cnicas microsc贸picas junto con el desarrollo de herramientas microflu铆dicas permitir谩 encontrar nuevas estrategias para prevenir el efecto infeccioso en pr贸tesis, mediante el estudio y entendimiento de la din谩mica de interacci贸n entre la situaci贸n microbiana y su respuesta con superficies met谩licas. Este proyecto pretende dise帽ar e implementar dispositivos microflu铆dicos que permitan la variaci贸n de las propiedades de superficie y desarrollar metodolog铆as y t茅cnicas de visualizaci贸n adecuadas mediante el uso de microscopia y procesarmiento de bioim谩genes.

2016 - 2019
El rol de las hormonas tiroideas sobre la expresi贸n de cadherinas-cateninas en el c谩ncer de colon: Alternativas Terap茅uticas


Dir.: Dra. Izaguirre, Mar铆a Fernanda
Descripci贸n
El c谩ncer colorrectal (CCR) es la cuarta y tercera causa de muerte en el mundo y en Argentina, respectivamente. Por ello, el diagn贸stico temprano y nuevas formas de tratamiento resultan esenciales para controlar la morbi-mortalidad de la enfermedad. La mol茅cula de adhesi贸n intercelular cadherina E y su mol茅cula conectora al citoesqueleto de actina, beta-catenina, son cr铆ticas en las transformaciones epitelio-mes茅nquima, en desarrollo de adenomas y adenocarcinomas de colon-recto. Por estas razones, el control de expresi贸n y funcionalidad, permite regular la movilidad y agresividad de las c茅lulas tumorales. Empleando modelos de anuros en desarrollo, nuestras investigaciones demostraron que los genes de cadherina E y beta-catenina se encuentran bajo control de la hormona triiodotironina (T3). Otros autores, trabajando con modelos murinos, han arribado a conclusiones similares, proponiendo importantes roles en diferenciaci贸n versus proliferaci贸n celular y met谩stasis para estas mol茅culas. Con este proyecto se propone trabajar en modelos murinos de inducci贸n del CCR y profundizar el conocimiento del rol que ejercen las hormonas tiroideas sobre el sistema cadherinas-cateninas en el desarrollo y progresi贸n tumoral. Adicionalmente, se analizar谩n alternativas terap茅uticas del CCR, enfocadas en controlar el nivel de hormonas tiroideas extra e intracelulares.

2015 - 2017
An谩lisis, procesamiento y modelado de la criptog茅nesis aberrante del colon en un modelo murino de c谩ncer colorrectal. Potenciales aplicaciones para un diagn贸stico precoz y nuevas terapias


Dir.: Dr. Adur, Javier Fernando
Descripci贸n
El incremento de la formaci贸n de criptas col贸nicas es un proceso clave que impulsa el crecimiento de los adenomas colorrectales. En la morfog茅nesis normal, son estructuras compactas cuyo eje luminal se orienta perpendicularmente a la superficie de la mucosa. Algunas mutaciones provocan la producci贸n de criptas anormales y p茅rdida de su orientaci贸n, llevando a la generaci贸n de adenomas colorrectales. Actualmente, no se conoce con exactitud c贸mo ocurre la producci贸n desordenada de las criptas. Tampoco existe una comprensi贸n cuantitativa de los cambios espaciales que gobiernan la din谩mica de la se帽alizaci贸n bioqu铆mica que lleva a una cripta nueva a transformarse en adenoma. Para responder a estas incertidumbres, en el presente proyecto se trabajar谩 sobre el c谩ncer colorrectal (CCR), qu铆micamente inducido en un modelo murino. Se realizar谩 un an谩lisis sistem谩tico en el que se procesar谩n los datos obtenidos y se modelar谩 la criptog茅nesis aberrante del colon; utilizando para ello un enfoque de la teor铆a de la biolog铆a de sistemas. Este abordaje implicar谩 primero, la identificaci贸n y tipificaci贸n de los cambios morfol贸gicos tempranos, que preceden al desarrollo del c谩ncer.

2014 - 2017
Generaci贸n de una l铆nea transg茅nica de pez cebra para estudiar la remodelaci贸n de uniones adherentes


Dir.: Dra. Sigot, Valeria
Descripci贸n
El proyecto consistir谩 en un desarrollo cient铆fico-tecnol贸gico para la generaci贸n de una nueva l铆nea transg茅nica estable y fluorescente de pez cebra que permitir谩 investigar la distribuci贸n de cadherinas y el remodelado de UAs (uniones adherentes) durante procesos din谩micos como la migraci贸n celular.

2014 - 2016
Digitalizaci贸n de im谩genes del Microscopio Electr贸nico de Barrido HITACHI HHS-2R


Dir.: Bioing. Laugero, Silvio
Descripci贸n
La presente propuesta pretende realizar una actualizaci贸n tecnol贸gica del sistema de visualizaci贸n y registro de las im谩genes del HHS-2R, adapt谩ndolo a las nuevas tecnolog铆as y posicion谩ndolo como un equipo m谩s vers谩til y con mejores prestaciones para los estudios de investigaci贸n y servicios a terceros, tanto de la FIUNER como de la Regi贸n. El proyecto involucra el desarrollo de un sistema de registro de im谩genes a trav茅s de componentes electr贸nicos y de una computadora, as铆 como el desarrollo de un software asociado que administre la adquisici贸n, an谩lisis y manipulaci贸n de las im谩genes adquiridas. Espec铆ficamente, se implementar谩 un sistema de adquisici贸n de la se帽as de video del MEB, basado en una PC y su posterior reconstrucci贸n y procesamiento, para ser observada en un monitor moderno y almacenada mediante medios digitales, que posibiliten su administraci贸n posterior.

2013 - 2014
Secuenciaci贸n y caracterizaci贸n de los transcriptos de b-catenina de Rhinella arenarumecuenciaci贸n y caracterizaci贸n


Dir.: Lic. Galetto, Carolina
Descripci贸n
尾-catenina es una prote铆na citos贸lica muy conservada entre especies de metazoos y no metazoos, que interviene en numerosos procesos biol贸gicos esenciales durante el desarrollo y el mantenimiento normal de los tejidos. Act煤a como plataforma para m煤ltiples interacciones con numerosas prote铆nas, dando lugar a sus dos funciones principales, la adhesi贸n celular y la activaci贸n transcripcional de diversos genes involucrados en el control de la morfolog铆a y del ciclo celular. Dada su importancia en los procesos celuares en los que interviene, es el centro de innumerables estudios estructurales, funcionales y evolutivos. As铆, nuestro grupo de trabajo se ha centrado en el estudio de los mecanismos moleculares que controlan la din谩mica de las uniones adherentes, mediadas por el complejo cadherina E/尾-catenina utilizando como modelo experimental al sapo Rhinella arenarum. Para avanzar en este objetivo es esencial conocer la secuencia nucleot铆dica completa del ARN mensajero (ARNm) de 尾-catenina de esta especie. Nuestros estudios preliminares, recientemente publicados (Galetto y col., 2012), posibilitaron obtener un fragmento de 539pb del ARNm de 尾-catenina de Rhinella arenarum. Dado que para tener una base experimental m谩s s贸lida, se necesita obtener la secuencia completa de dicho gen, el presente proyecto permitir谩 implementar la herramienta molecular requerida para tal fin. Para ello, el ARNm de 尾-catenina de Rhinella arenarum ser谩 aislado implementando la t茅cnica de Amplificaci贸n R谩pida de los Extremos de ADN copia (cDNA) (RACE-PCR), partiendo del conocimiento de una secuencia interna del ARNm de inter茅s. Posteriormente, el ARNm obtenido ser谩 secuenciado y sus secuencias nucleot铆dicas y aminoac铆dica analizadas mediante diversas herramientas bioinform谩ticas, que permitan establecer una filogenia y la diferencias evolutivas con otras especies de metazoos y no metazoos.

2012 - 2015
Rol de la adhesi贸n celular en la morfog茅nesis y el mantenimiento de la arquitectura epitelial


Dir.: Dr. Casco, Victor Hugo
Descripci贸n
La morfog茅nesis y la arquitectura de un epitelio en desarrollo son controladas tanto por la forma como por los contactos celulares, mediados por moleculas de adhesi贸n celular reguladas espacial y temporalmente. Desde hace varios a帽os, nuestro grupo estudia el rol de la mol茅cula de adhesi贸n intercelular epitelial cadherina E, como factor clave de adhesi贸n epitelial y en el establecimiento y mantenimiento de la arquitectura epiletial in vivo. Para avanzar en nuestros estudios, debemos correlacionar los estudios morfom茅tricos con estudios moleculares por RT-PCR para detecci贸n y cuantificaci贸n de los ARNm de cadherina E y b-catenina y la secuenciaci贸n de los genes en Rhinella arenarum. Necesitamos analizar los patrones de expresi贸n a nivel ultraestructural, aplicando microscopia electr贸nica de transmisi贸n cl谩sica, as铆 como inmunohistoqu铆mica de alta resoluci贸n. Finalmente, planificamos realizar un estudio morfom茅trico din谩mico en montaje completo, utilizando microscopia de desconvoluci贸n digital de time-lapse. Para ello, desarrollaremos un microscopio de desconvoluci贸n digital a partir de la motorizaci贸n de un equipo comercial y el desarrollo posterior de un software de desconvoluci贸n.

2012 - 2013
Desarrollo de una metodolog铆a de calibraci贸n para microscopia de fluorescencia multidimensional cuantitativa


Dir.: Bioing. Diaz Zamboni

Descripci贸n
La biolog铆a molecular y celular busca comprender las complejas funciones celulares y las interacciones c茅lula-medio ambiente. Entre otras t茅cnicas, las im谩genes multidimensionales de microscopia contribuyen con informaci贸n muy relevante, dado que las c茅lulas y los tejidos son estructuras tridimensionales, que constantemente sufren cambios estructurales y funcionales en el transcurso de su vida, por lo que todas sus actividades ocurren en coordenadas espacio-temporales.
La microscopia de fluorescencia es la base de la microscopia multidimensional. B谩sicamente, es un modo de microscopia 贸ptica que utiliza el fen贸meno de fluorescencia para la observaci贸n de espec铆menes. Es ampliamente aplicado en Biolog铆a Celular y Molecular, ya que permite la observaci贸n de sustancias fluorescentes que pueden ser espec铆ficamente localizadas usando diversas t茅cnicas de marcaci贸n de estructuras celulares. Sin embargo, para realizar mediciones precisas es necesario corregir las im谩genes de las degradaciones naturales que introduce el microscopio.
En el presente proyecto se desarrollar谩 una metodolog铆a de calibraci贸n para un sistema de microscopia multidimensional. Esta se basar谩 en la correci贸n de aberraciones que generalmente no son tenidas en cuenta en la microscopia 贸ptica convencional. Se espera como resultado final el desarrollo de una t茅cnica que asociada a un sistema de adquisici贸n controlado por software permita realizar an谩lisis cuantitativo sobre las im谩genes digitales capturadas.

2011 - 2014
Estudios moleculares y celulares del sistema de endotelinas en c谩ncer colo-rectal


Dir.: Casco, Victor Hugo
Descripci贸n
En el presente proyecto se utilizar谩n t茅cnicas de microscopia 贸ptica y electr贸nica cl谩sicas y de alta resoluci贸n (Microscopia de Desconvoluci贸n Digital) combinadas con t茅cnicas de biolog铆a molecular y celular (RT-PCR, inmunohistoqu铆mica, hibridaci贸n in situ, etc.), con la finalidad de establecer los roles del sistema de las endotelinas en el desarrollo de c谩ncer colo-rectal de mam铆feros, usando ratones como modelo animal. Los estudios se llevar谩n a cabo sobre animales normales, animales inducidos a desarrollar c谩ncer colo-rectal con azoximetano y animales inducidos con azoximetano, sometidos al bloqueo de los receptores ETA y ETB en estadios previos al desarrollo de c谩ncer colo-rectal murino.

2010 - 2011
Estudio de la neurog茅nesis y divisi贸n celular en la retina, empleando el pez cebra, Danio rerio, como organismo modelo


Dir.: Lic. Paravani, Enrique Valent铆n
Descripci贸n
La determinaci贸n del destino celular durante la citocinesis juega un importante rol en el control de elecci贸n del destino celular en invertebrados. Durante la neurog茅nesis de Drosophila, por ejemplo, la segregaci贸n asim茅trica de la prote铆na Numb, que inhibe las se帽ales Notch, es necesaria para qu茅, despu茅s de la 煤ltima divisi贸n celulare, las c茅lulas hijas tengan destinos celulares diferentes. En vertebrados, el rol de la segregaci贸n asim茅trica es incierto y no se conoce c贸mo se regula este proceso. Se propone el estudio del rol de las prote铆nas Numb y N-cadherina durante el desarrollo de las c茅lulas neuronales del globo ocular del pez cebra. Nuestra hip贸tesis de trabajo es que Numb es requerida para mantener la adhesi贸n mediada por N-cadherina y la polaridad de las c茅lulas neuronales de la retina de vertebrado. Para cumplir con estos objetivos, el presente proyecto plantea la implementaci贸n del setup de un acuario para la reproducci贸n y crianza del pez cebra, organismo modelo empleado para diferentes estudios celulares y moleculares en las 谩reas de la biolog铆a del desarrollo y neurobiolog铆a. Una vez puesto en marcha el acuario, el grupo estar谩 en condiciones de comenzar el estudio sobre la divisi贸n celular y neurog茅nesis, empleando herramientas bioinform谩ticas y t茅cnicas de biolog铆a molecular y celular.

2007 - 2010
Influencia de T3 sobre los niveles de expresi贸n de cadherina E, b- y a-catenina en el est贸mago larval de Bufo arenarum


Dir.: Dra. Izaguirre, Mar铆a Fernanda
Descripci贸n
En este proyecto se combinar谩n t茅cnicas de microscopia cl谩sica y de alta resoluci贸n, de inmunohistoqu铆mica, western blot, northern blot y cuantificaci贸n morfom茅trica por an谩lisis de im谩genes, con el fin de establecer el rol que cumplen las mol茅culas de adhesi贸n caherina E, Beta y Alfa-catenina en la remodelaci贸n del est贸mago larval durante la metamorfosis de Bufo arenarum.

2007 - 2009
Aislamiento, clonado y expresi贸n de la prote铆na recombinante para el factor de crecimiento fibrobl谩stico 8 (FGF8) de Bufo arenarum


Dir.: Dra. Izaguirre, Mar铆a Fernanda
Descripci贸n
Los estudios embriol贸gicos han demostrado que el origen de los 贸rganos de vertebrados involucra complejas interacciones celulares de diferentes tejidos. Las investigaciones bioqu铆micas y moleculares, sugieren que las se帽ales end贸genas en la cresta ectod茅rmica apical (AER) ejercidas por el Factor de Crecimiento Fibrobl谩stico 8 (FGF-8), son claves en los procesos de iniciaci贸n del desarrollo de los ap茅ndices pares en vertebrados. El objetivo es obtener una prote铆na recombinantes para el聽 FGF-8 empleando t茅cnicas moleculares, a partir del aislamiento del gen de Rhinella arenarum y analizar la secuencia nucleot铆dica con herramientas bioinform谩ticas. La obtenci贸n de la prote铆na recombinante, nos brindar谩 la posibilidad de llevar a cabo estudios estructurales y fisiol贸gicos del FGF-8 durante el desarrollo de los miembros en nuestro modelo animal (R. arenarum).

2005 - 2008
An谩lisis tridimensional de patrones de expresi贸n g茅nica utilizando microscopia de alta resoluci贸n


Dir.: Dr. Casco, Victor Hugo
Descripci贸n
El proyecto propuesto combina las t茅cnicas de: inmunofluorescencia (utilizada para el marcado de genes espec铆ficos), seccionamiento 贸ptico (corte virtual de espec铆menes de grueso espesor) y modelizaci贸n por computadora (representaci贸n en 3D y 4D); con el objetivo de obtener informaci贸n tridimensional del patr贸n de expresi贸n de diferentes genes.

2001 - 2003
Desarrollo de un microscopio de seccionamiento 贸ptico


Dir.: Dr. Casco, Victor Hugo
Descripci贸n
Se pretende desarrollar e implementar un prototipo que permita realizar estudios tridimensionales cuali- y cuantitativos. El desarrollo y la implementaci贸n del "Microscopio de Seccionamiento 脫ptico" se efectuar谩 a trav茅s del acoplamiento a un microscopio 贸ptico est谩ndar de: un sistema de adquisici贸n de im谩genes basado en una CCD y un sistema electromec谩nico de avance microm茅trico de la platina, desarrrollado para tal efecto. El sistema ser谩 evaluado integralmente en cuanto a sus caracter铆sticas mec谩nicas (velocidad, estabilidad, precisi贸n, repetitividad, etc.) y se desarrollar谩 un m茅todo de c谩lculo (desconvoluci贸n) basado en la Funci贸n de Transferencia 脫ptica (OTF) para aumentar la calidad 贸ptica de las im谩genes bidimensionales (brillo, contraste, resoluci贸n, etc.) para obtener una adecuada reconstrucci贸n tridimensional.

2000 - 2001
Desarrollo de modelos experimentales para el estudio de efectos de los piretroides sobre vertebrados (Amphibia-Anura)


Dir.: Dra. Izaguirre, Mar铆a Fernanda
Descripci贸n
Se evaluarion estad铆sticamente en condiciones de laboratorio, los efectos agudos (letalidad, superviciencia), subcr贸nicos y cr贸nicos (tasa de crecimiento y desarrollo) y las posibles alteraciones a nivel histol贸gico y subcelular, producidas por la acci贸n del piretroide cipermetrina. Se realizaron bioensayos de toxicidad de cipermetrina sobre estadios cr铆ticos como embriones y larvas de dos especies de anfibios anuros, los que por su sensibilidad a los biocidas tienen importancia ecol贸gica.

1998 - 2001
Estudios morfol贸gicos y bioqu铆micos de la adhesi贸n celular y su implicancia en los mecanismos de diferenciaci贸n del m煤sculo card铆aco de vertebrados


Dir.: Dr. Casco, Victor Hugo
Descripci贸n
Establecer un patr贸n de expresi贸n espacial y temporal de las mol茅culas de adhesi贸n celular, caderinas y N-CAM, as铆 como tambi茅n de las cateninas citoplasm谩ticas, durante el desarrollo embrionario del m煤sculo card铆aco de vertebrados.


Subsidios para infraestructura y equipamiento CyT

2013 - 2015
Fortalecimiento del Centro de Servicios de Alta Tecnolog铆a para biociencias de la Facultad de Ingenier铆a de la Universidad Nacional de Entre R铆os


2012
Programa de reparaci贸n y mantenimiento de equipos de la UNER: Reacondicionamiento del Microscopio Electr贸nico de Transmisi贸n Philips EM-201 y del termociclador IVEMA T18 del LAMAE


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